什么是浮島效應

導讀：什么是浮島效應 灰樹花菌絲體的液態深層培養過程是怎樣的?

生物浮島技術是按照自然界自身規律,運用無土栽培技術原理,采用現代農藝與生態工程措施綜合集成的水面無土種植植物技術。以人工方式把高等水生植物或改良的陸生植物無土種植到富營養化水域水面上,通過植物根系的截留、吸收、吸附作用和物種競爭相克機理、水生動物的攝食

灰樹花菌絲體的液態深層培養過程是怎樣的?

1.搖瓶培養液體菌種 這是液態深層生產灰樹花菌絲體工藝中最基本的技術。搖瓶培養的液體菌種數量較少，可供發酵罐接種用，也可直接用于栽培生產，一般適用于擴接固體菌種（主要是栽培種），生產規模不大的菌種廠適宜采用。用搖瓶培養液體菌種，周期短，可連續多次擴大培養（不超過5次），對發菌速度、菌種質量一般無不良影響。

將培養液裝入500毫升三角燒瓶內，每瓶裝量為100毫升，加入10～15粒小玻璃珠或直徑在0.8厘米以下的玻璃碎片，用棉塞和牛皮紙封口，121℃滅菌40分鐘，取出冷卻至28℃時接種。每瓶接入斜面母種數小塊，使氣生菌絲一面向上懸浮于液面，在24～26℃恒溫下靜止培養48小時。當氣生菌絲延伸到培養液中時，置往復式搖床上進行振蕩培養，振蕩頻率為80～100次/分，振幅（沖程）6～10厘米；如果用旋轉式搖床，偏心距為4厘米，振蕩頻率為150～220轉/分，因旋轉速度過快，菌絲球一般較大，且菌絲球表面絨毛狀菌絲少，不適于做菌種使用。因此，一般旋轉式搖床的偏心距應作適當調整方可使用。搖床室溫度控制在24～26℃，培養72～96小時。食用菌種類不同，搖床培養的技術參數也有區別，灰樹花一般在25℃，200轉/分鐘，偏心距4厘米，搖瓶3～4天培養結束，培養液呈黃棕色，清澈透明，有許多菌絲小球，鏡檢菌絲球直徑，要求在1～2毫米內。取樣品離心過濾（2500轉/分，15分鐘），105℃烘干至恒重，稱菌絲體干重，達10克/升即可。這樣的菌種可再擴接于三角瓶內，每瓶接種菌液10毫升，繼續擴大進行搖瓶培養，因菌絲球正處于旺盛生長狀態，分散度好，能縮短搖瓶培養時間，快者2天即可終止培養。如果培養液混濁，大多是細菌污染的結果。培養液經顯微鏡檢查合格后，方可用于生產。搖瓶培養的液體菌種，在4℃冰箱中保存20～30天，在15～20℃室溫中保存5～7天，對接種成功率、產量均無不良影響。

在生產實踐中，也可因陋就簡利用大號玻璃瓶制備液態菌種，但要有效果較好的空氣過濾裝置。

2.菌絲體的三級擴大培養 一級種子罐定容35升，搖瓶種子通過裝有閥門的接種管接入，按5%～7%的比例接入搖瓶種子1.5～2升，按發酵工藝培養成熟；一級種子再接入二級種子罐，定容350升，按10%接入一級種子35升，培養成熟。無論哪一級菌種罐，在接種前須先將罐體空罐消毒（135～140℃）1小時，再注入培養液實消。程序是先預熱夾層至90℃，10分鐘后，放蒸氣進入內層升至115℃左右飽壓恒溫8分鐘，不宜過久，以免破壞養分。然后向夾層注灌冷水降溫，降至26℃即可接種。接種時，要注意開排氣口，關進氣口，降壓至0.05兆帕。同時抽樣鏡檢并用肉湯培養基檢查培養液滅菌情況。0時，取樣檢查雜菌、0.D值（光密度）、初糖；12、24、36、48小時，各取樣檢查一次0.D值、殘糖、pH。正常培養48小時后，pH降至5.0，0.D值凈長0.5左右，糖耗一個單位左右，即可轉接容積較大的第三級培養罐。

第三級培養罐容積10噸，一般定容7500升，培養液與消泡劑（聚環氧丙烷甘油醚）同時加入，消泡劑加入量占培養液的0.03%為2.5升。按10%接種量（2個二級種子罐接1個三級罐）接入菌種。先空消罐體（14 0℃）1小時，再實消（115～118℃）50～60分鐘，然后降至25℃接種。前期培養溫度25～26℃，后期26～27℃。pH控制在5.5左右，降低時則流加尿素，加量一般為培養液的0.2%。發酵前期通風量1∶05（體積/體積），中期溫度上升可加大通風量至1∶1，并防止pH下降過快。接種后，葉輪轉速180轉/分，培養72小時后，中間每隔12小時取樣測糖、氮、pH、雜菌。中途補料可增加菌絲生長速度，縮短發酵時間，增加菌體濃度。補料可分次在20小時、40小時、60小時補入，補入料量視具體情況而定。

注意控制培養時間，過早放罐菌絲體產量低，太遲則菌體老化自溶，三級罐一般培養3～4天即可。放罐標準：pH下降至5，殘糖2.5左右，氨態氮不超過30毫克/毫升，菌球濃度達到1000～1500個/毫升，或經3000轉/分離心10分鐘，每100毫升菌泥濕重在20～25克。

液體菌種發酵要根據菌類生長要求選擇不同工藝條件，灰樹花一般控溫25℃，罐壓0.05兆帕，通氣量（液體∶氣體）1∶0.3～0.5，攪拌200轉/分。

檢查發酵液質量項目包括：純度檢查，鏡檢或平板培養無細菌、霉菌檢出；活力檢查，鏡檢菌球邊緣菌絲分枝細密，用結晶紫染色時著色深，菌絲細胞原生質尚未出現凝集現象和空泡，培養液靜止5分鐘，菌泥不下沉；80%菌球直徑小于1毫米。

培養液經板框壓濾或連續離心分離得菌絲體，經烘干可以直接食用或作飲料、食品添加劑；也可提取灰樹花胞內多糖，培養液濃縮可得胞外多糖，均可作為制備藥物的原料。

含大量菌絲的培養液可代替母種用于原種生產，也可代替原種用于栽培種生產。用液體菌種擴大的菌種，發菌快，活力強，用于栽培定植快、污染率低。在大規模栽培中，菌絲體液可注接已滅過菌的栽培袋，一個5噸發酵罐，3天內便可生產3.5噸液體菌種，按5%的接種量計算，500克干料的栽培袋注入液體菌種25毫升，3.5噸液體菌種可接種70噸培養料，約14萬個栽培袋。

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